小檗碱干预缺血性脑卒中大鼠的作用机制研究

目的 研究小檗碱干预缺血性脑卒中大鼠的相关作用机制.方法 选取85只无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠,随机选取15只仅行假手术,设为健康组,其余70只建立缺血性脑卒中模型.将建模成功的62只大鼠随机分为缺血性脑卒中组(15只)、小檗碱低剂量组(15只)、小檗碱高剂量组(16只)、尼莫地平组(16只).小檗碱低剂量组、高剂量组分别以100 mg/kg、200 mg/kg小檗碱灌胃,尼莫地平组以40 mg/kg尼莫地平灌胃,健康组、缺血性脑卒中组以等量生理盐水灌胃,每日1次,连续干预14 d.Morris水迷宫实验观察大鼠认知功能;TTC染色法测定脑梗死体积;羟胺法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)水平、酶联免疫吸附法(ELISA)测定一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量;测磷法测定脑组织线粒体钙,镁-三磷酸腺苷(Ca2+,Mg2+-ATP)酶及Na+,K+-ATP酶活性;HE染色法观察脑皮质病理变化;TUNEL荧光染色法测定海马区神经元凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定脑组织沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)、5-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK蛋白相对表达量.结果 缺血性脑卒中组神经元结构模糊,胞体肿胀,尼氏体消失,并出现软化灶、炎性细胞浸润,小檗碱干预后有所改善,尼莫地平组改善最为明显,其次为小檗碱高剂量组,最后为小檗碱低剂量组.与缺血性脑卒中组比较,小檗碱低剂量组、小檗碱高剂量组、尼莫地平组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,目标象限停留时间延长,脑梗死体积减小,脑组织SOD含量增加,NO、eNOS含量减少,Na+,K+-ATP酶和Ca2+,Mg2+-ATP酶活性增强,海马区神经元凋亡率降低,SIRT1蛋白相对表达量、p-AMPK/AMPK升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与小檗碱低剂量组比较,小檗碱高剂量组、尼莫地平组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,目标象限停留时间延长,脑梗死体积减小,脑组织SOD含量增加,NO、eNOS含量减少,Na+,K+-ATP酶和Ca2+,Mg2+-ATP酶活性增强,海马区神经元凋亡率降低,SIRT1蛋白相对表达量、p-AMPK/AMPK升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与小檗碱高剂量组比较,尼莫地平组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,目标象限停留时间延长,脑梗死体积减小,脑组织SOD含量增加,NO、eNOS含量减少,Na+,K+-ATP酶和Ca2+,Mg2+-ATP酶活性增强,海马区神经元凋亡率降低,SIRT1蛋白相对表达量、p-AMPK/AMPK升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 小檗碱可改善缺血性脑卒中大鼠认知功能、缩小梗死体积、减轻氧化应激及脑组织病理变化,改善脑组织能量代谢,减少海马神经元凋亡,推测其作用机制与激活AMPK信号通路有关.