舒肝宁注射液对非酒精性脂肪性肝病组织工程肝保护作用的机制研究

目的:探讨舒肝宁注射液对非酒精性脂肪性肝病新型组织工程肝脏模型抗氧化应激的作用机制.方法:将SD大鼠肝脏去细胞化制为肝脏胶原支架,用人HepG2细胞再细胞化,分别用正常培养基及高脂培养基灌注肝脏,从而获取组织工程肝(TE)和组织工程脂肪肝(TEF)模型,并对TEF肝脏给予舒肝宁注射液处理.本研究设定正常组、FFA组及舒肝宁注射液组,用CCK8检测药物的细胞毒性,分别从细胞凋亡、病理、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)和线粒体功能等方面评估舒肝宁对氧化应激的调节作用.结果:灌注8 d后进行指标检测,CCK-8提示舒肝宁注射液不同稀释浓度(10-3～10-8)均无明显的细胞毒性,安全性良好.HE结果显示舒肝宁可明显减少游离脂肪酸(FFA)引起的细胞死亡;TUNEL染色也显示舒肝宁可减少FFA组中凋亡细胞的数量.进一步检测发现舒肝宁可明显降低FFA组中肝细胞MDA、ROS水平.免疫荧光染色显示FFA组肝细胞中ATP5 A表达较弱,而舒肝宁处理后其表达明显增加,提示细胞的线粒体功能有所恢复.结论:舒肝宁通过减少TEF肝脏MDA、ROS水平来抑制氧化应激减轻FFA诱导的脂肪肝中肝细胞的凋亡以及线粒体的损伤.