高效液相色谱法测定人血中羟氯喹浓度方法学优化及应用性分析

目的:建立一种新的高效液相色谱法测定人全血中羟氯喹的浓度,并对方法进行优化.方法:取300 μL全血样本,加入25 μg·mL-甲硝唑溶液10 μL作为内标,用900 μL乙酸乙酯进行液液萃取,氮气吹干后用流动相200 μL复溶,取20 μL上清液进样.使用Symmetry@C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm)进行分离,以20 mmol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(85∶15,v/v,磷酸调pH =3.0)为流动相,流速:0.8 mL·min-1,柱温:35℃,检测波长:254 nm.考察该方法的特异性、标准曲线、精密度、准确度、稳定性和提取回收率.结果:羟氯喹在100 ～5000 ng· mL-1浓度范围内线性关系良好,标准曲线方程为f=0.03×10-1C-0.12×1O-1(r =0.9996);日内、日间精密度RSD均小于4.0％,准确度高于85％,全血样品提取回收率为(78.08±5.32)％(n=5).结论:本方法灵敏度高、选择性高、操作简洁、检测时间短、结果准确可靠,能够满足检测人血中羟氯喹浓度的需求,经优化后缩短了检测时间,提升了检测效率,适合于临床诊疗监测及药效学研究.