白花丹素通过调控miR-499a-5p表达对阿尔茨海默病细胞凋亡和氧化损伤的影响

目的:探讨白花丹素(PL)调控miR-499a-5p表达对阿尔茨海默病(AD)细胞模型凋亡和氧化损伤的影响.方法:采用β-淀粉样蛋白片段25-35(Aβ25-35,5μmol·L-1)诱导SK-N-SH细胞24 h建立AD细胞模型.将SK-N-SH细胞分为正常对照组(正常培养的细胞)、模型组(5 μmol·L-1 Aβ25-35)、PL低(5μmol·L-1Aβ25-35+ 10 μmol·L-1 PL)、中(5μmol·L-1Aβ25-35+20 μmol·L-1 PL)、高(5μmol·L-1 Aβ25-35 +40 μmol·L-1 PL)剂量组、miR-NC组(转染miR-NC,5μmol·L-1 Aβ25-35)、miR-499a-5p组(转染miR-499a-5p,5μmol·L-1 Aβ25-35)、PL+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC,40 μmol·L-1 PL,5μmol·L-1 Aβ25-35)、PL+anti-miR-499a-5p组(转染anti-miR-499a-5p,40 μmol·L-1PL,5μmol·L-1 Aβ25-35).采用试剂盒检测细胞丙二醛(MDA)水平以及活性氧(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测剪切型半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase3)和剪切型半胱氨酸蛋白酶9(cleaved-caspase9)蛋白表达;RT-qPCR检测miR-499a-5p表达.结果:与正常对照组比较,模型组SK-N-SH细胞凋亡率、MDA水平、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白水平显著升高(P＜0.05),SOD和GSH-Px活性、miR-499a-5p相对水平显著降低(P＜0.05).与模型组比较,PL低、中、高剂量组SK-N-SH细胞凋亡率、MDA水平、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白水平显著降低(P＜0.05),SOD和GSH-Px活性、miR-499a-5p相对水平显著升高(P＜0.05).与miR-NC组比较,miR-499a-5p组SK-N-SH细胞凋亡率、MDA水平、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白水平显著降低(P＜0.05),SOD和GSH-Px活性显著升高(P＜0.05).抑制miR-499a-5p表达显著减弱PL处理对细胞凋亡、MDA水平、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白水平以及SOD和GSH-Px活性的影响(P＜0.05).结论:PL通过上调miR-499a-5p表达可减轻Aβ25-35诱导的SK-N-SH细胞凋亡和氧化应激损伤.