SIRT6通过下调CD36增加动脉粥样硬化斑块稳定性的机制研究

目的 通过动物实验和细胞实验分析SIRT6增加动脉粥样硬化斑块稳定性的机制.方法 本实验时间为2019年12月至2021年12月.动物实验:将10只雄性C57BL小鼠作为空白对照组;将20只雄性ApoE-/-小鼠随机分为动脉粥样硬化组和动脉粥样硬化+SIRT6 Tg组,每组10只.采用高脂饲料喂养动脉粥样硬化组和动脉粥样硬化+SIRT6 Tg组小鼠16周以构建动脉粥样硬化小鼠模型.其中动脉粥样硬化+SIRT6 Tg组通过尾静脉注射200μl滴度为1×109 eg/ml的腺相关病毒(AAV)-SIRT6,共注射3次,在1周内完成注射,以过表达SIRT6.干预16周后,采用HE染色检测各组小鼠动脉粥样硬化斑块面积,Masson染色检测各组小鼠动脉粥样硬化斑块中胶原含量,免疫组化染色检测各组小鼠动脉粥样硬化斑块中CD68表达水平.细胞实验:取对数生长期的巨噬细胞,将其分为空白对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组(采用50μg/ml的ox-LDL干预24 h)、ox-LDL+Ad-SIRT6组(转导腺病毒Ad-SIRT624 h,用50μg/ml的ox-LDL干预24 h);采用Western blotting法检测各组巨噬细胞中SIRT6、CD36表达水平.取对数生长期的巨噬细胞,将其分为空白对照组、ox-LDL组(采用50μg/ml的ox-LDL干预24 h)、ox-LDL+Ad-SIRT6组(转导腺病毒Ad-SIRT624 h,用50μg/ml的ox-LDL干预24 h)、ox-LDL+Ad-SIRT6+Ad-CD36组(转导腺病毒Ad-SIRT624 h,转导腺病毒Ad-CD3624 h,用50μg/ml的ox-LDL干预24 h);采用TUNEL染色检测各组巨噬细胞凋亡率.结果 动物实验:空白对照组小鼠动脉粥样硬化斑块面积为0,动脉粥样硬化组小鼠动脉粥样硬化斑块面积高于动脉粥样硬化+SIRT6 Tg组(P<0.05).空白对照组小鼠动脉粥样硬化斑块中胶原含量为0,动脉粥样硬化组小鼠动脉粥样硬化斑块中胶原含量低于动脉粥样硬化+SIRT6 Tg组(P<0.05).空白对照组小鼠动脉粥样硬化斑块中CD68表达水平为0,动脉粥样硬化组小鼠动脉粥样硬化斑块中CD68表达水平高于动脉粥样硬化+SIRT6 Tg组(P<0.05).细胞实验:ox-LDL组、ox-LDL+Ad-SIRT6组巨噬细胞中SIRT6表达水平低于空白对照组,CD36表达水平高于空白对照组(P<0.05);ox-LDL+Ad-SIRT6组巨噬细胞中SIRT6表达水平高于ox-LDL组,CD36表达水平低于ox-LDL组(P<0.05).ox-LDL组、ox-LDL+Ad-SIRT6组、ox-LDL+Ad-SIRT6+Ad-CD36组巨噬细胞凋亡率高于空白对照组,ox-LDL+Ad-SIRT6组、ox-LDL+Ad-SIRT6+Ad-CD36组巨噬细胞凋亡率低于ox-LDL组,ox-LDL+Ad-SIRT6+Ad-CD36组巨噬细胞凋亡率高于ox-LDL+Ad-SIRT6组(P<0.05).结论 SIRT6能够缩小ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块面积,增加动脉粥样硬化斑块中胶原含量,减少动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞的浸润,抑制巨噬细胞凋亡,从而增加动脉粥样硬化斑块稳定性,而这一作用是通过下调CD36的表达水平来实现的.