一测多评法同时测定蛹虫草中5种核苷类成分的含量

本研究为建立一测多评法同时测定蛹虫草中尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)腺苷含量,并验证方法准确性,采用RP-HPLC进行含量测定,检测波长260nm,进样量5μL,流速0.8mL·min-1,采用流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱:0～0min,0→10％A;10～30 min,10％→20％A;色谱柱采用岛津Inert Sustain AQ-C18,(5 μm,4.6 mm×150 mm),柱温30℃.以腺苷为参照物,建立其对尿苷、鸟苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)腺苷的相对校正因子,并用该校正因子进行尿苷、鸟苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)腺苷的含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定蛹虫草中5种核苷的含量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性.结果显示,尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)腺苷进样量分别在2.460～49.20μg·mL-1、2.375～47.50μg·mL-1、2.570～51.40μg·mL-1、2.515～50.30 μg·mL-1和2.490～49.80 μg·mL-1范围内呈现良好线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为98.08％(RSD=1.86％)、99.15％(RSD=1.25％)、97.35％(RSD=1.68％)、98.86％(RSD=1.09％)和 101.25％(RSD=1.35％).蛹虫草中尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和 N6-(2-羟乙基)腺苷的含量分别为0.625～1.508 mg·g-1、0.347～1.012 mg·g-1、0.624～1.092 mg·g-1、0.315～1.297 mg·g-1 和0.546～1.226mg·g-1.本研究建立的一测多评法可作为蛹虫草中5种核苷类化学成分的含量测定方法.该方法具有良好的准确性、稳定性及重复性;采用一测多评法与外标法实测值之间无显著差异.