lncRNA GAS5对雨蛙肽体外诱导急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)生长阻滞特异性转录因子5(GAS5)对雨蛙肽(caerulein)诱导的急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响及机制.方法 取对数生长期胰腺腺泡细胞AR42J,分为Control组(正常培养)、Caerulein组(caerulein诱导)、Caerulein+Vector组(转染阴性对照载体,caerulein诱导)及Caerulein+GAS5组(转染GAS5过表达对照载体,caerulein诱导),Caerulein+GAS5+miR-NC组(转染GAS5过表达对照载体、mimics control,caerulein诱导)及Caerulein+GAS5+miR-135a组(转染GAS5过表达对照载体、miR-135a mimics,caerulein诱导),分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验、实时聚合酶链反应(Realtime PCR)、流式细胞术及Western blot检测各组细胞增殖、miR-135a表达、细胞凋亡水平及剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(C-Caspase-3)、C-Caspase-9表达;将miR-135a mimics(miR-135a组)、mimics control(miR-NC组)和含GAS5结合位点的野生型萤光素酶报告载体(WT,WT组)、含突变以后GAS5结合位点的突变型萤光素酶报告载体(MUT,MUT组)共转染至胰腺腺泡细胞,采用萤光素酶活性测定试剂盒分析各组胰腺炎腺泡细胞萤光素酶活性变化.结果 与Control组比较,Caerulein组胰腺腺泡细胞存活率降低、凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与Caerulein+Vector组比较,Caerulein+GAS5组caerulein诱导的胰腺腺泡细胞的存活率升高、凋亡率降低,C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与Caerulein+GAS5+miR-NC组比较,Caerulein+GAS5+miR-135a组胰腺腺泡细胞存活率降低、凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.001);与miR-NC+WT组比较,miR-135a+WT组细胞萤光素酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-NC+MUT组比较,miR-135a+MUT组细胞萤光素酶活性无变化,差异无统计学意义(P>0.05).结论 过表达lncRNA GAS5可减少caerulein诱导的急性胰腺炎腺泡细胞凋亡,其机制可能与下调miR-135a表达有关.