剑尾鱼IgD基因的克隆及其在嗜水气单胞菌疫苗免疫后的表达变化

[目的]以剑尾鱼(Xiphophorus helleri)为试验对象,克隆获得其免疫球蛋白D(Immunoglobulin D,IgD)的cDNA序列,初步探讨该基因在剑尾鱼中的组织分布及在疫苗免疫后的表达规律.[方法]根据已知的EST库设计引物,利用PCR等方法获得剑尾鱼IgD基因cDNA序列并进行分析.运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测IgD的组织分布及嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)疫苗免疫后,在头肾、脾脏和肠中的相对表达变化.[结果]剑尾鱼IgD完整开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为3879 bp,编码1298个氨基酸,预测其分子量大小为145.5 ku;由可变区和恒定区组成,恒定区包含CH1-CH2-CH3-CH4-CH5-CH6-CH7和1个跨膜区(Transmembrane region,TM).系统进化分析显示,剑尾鱼与鳜(Siniperca chuatsi)IgD的基因序列一致性最高、为70％.IgD在剑尾鱼头肾、脾和肠中均有分布,经嗜水气单胞菌疫苗腹腔注射免疫后,IgD在头肾、脾和肠中发生差异性表达,肾和脾脏中IgD表达量显著下调,肠中IgD表达量显著上调.[结论]IgD可能在剑尾鱼机体免疫应答与肠道粘膜免疫中发挥重要作用.