酵母双杂交技术筛选与绵羊微管解聚蛋白相互作用的蛋白

ZHANG Limeng,LI Runting,NIE Xiaoning,LI Yuhua,LIU Aiju,XING Zhenzhen,NIE Wenying,MA Runlin,WANG Linqing,CHEN Longxin

Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences)（2022）

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摘要

采用TRIzol法提取绵羊卵巢组织总RNA,运用RT–PCR技术扩增绵羊微管解聚蛋白基因(STMN1)的编码区序列;通过同源重组技术构建重组诱饵表达载体pGBKT7–STMN1,鉴定该诱饵蛋白在酵母双杂交系统中的自激活活性、细胞毒性和表达情况;利用诱饵质粒pGBKT7–STMN1从绵羊卵巢组织细胞的酵母双杂交cDNA文库筛选互作的宿主蛋白.结果显示:成功构建重组诱饵质粒pGBKT7–STMN1,并对酵母细胞无自激活活性和细胞毒性作用,且能在酵母细胞中正常表达;筛选获得12个与STMN1相互作用的克隆,经测序比对分析和点对点验证,得到CREB和FOXM1共2个互作的宿主蛋白,这2个蛋白可能参与调控细胞的增殖、周期、凋亡等过程.

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