基于特征肽段定量新冠病毒刺突蛋白S1亚基的方法建立

目的:建立基于特征肽段的新冠病毒刺突蛋白S1亚基定量方法.方法:根据蛋白序列、糖基化修饰位点等筛选特征肽段;利用胰蛋白酶水解蛋白为相对分子质量较小的肽段,并优化反应参数;最后结合同位素稀释质谱法建立刺突蛋白S1亚基定量检测方法,并进行方法学考察.结果:基于特征肽段的同位素稀释质谱法检测样品中S1亚基质量分数为1.007×10-3,扩展不确定度为0.070×10-3,结果准确,与基于氨基酸分析的同位素稀释质谱法检测结果比较无显著差异.特征肽段质量分数在0.47×10-9～1×10-3范围内,回归相关系数R2>0.9999,线性良好.该方法日内与日间精密度均小于5％,检测准确度均在95％ ～105％ 之间,重复性良好.该方法不受基质中其他蛋白的干扰,可溯源至国际单位制,有助于该蛋白绝对定量、标准物质研制等.结论:该方法可行性良好,后期可供参考用于新冠病毒刺突蛋白S1亚基的定量.