miR-205-5p对RBM47的调控作用及对食管鳞癌细胞侵袭迁移的影响

目的 探讨微小RNA-205-5p(miR-205-5p)对RNA结合蛋白47(RBM47)的调控作用,及对食管鳞癌细胞侵袭迁移的影响.方法 取人食管鳞状细胞癌细胞系(TE14和KYSE70)和人食管上皮细胞(HET-1 A),实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组细胞miR-205-5 p、RBM47 mRNA表达水平.取KYSE70细胞,分为空白对照组、miR-205-5p抑制剂(miR-205-5p-inhibitor)组、miR-205-5p抑制剂阴性对照(miR-205-5p-NC)组、RBM47过表达腺病毒(Ad-RBM47)组、Ad-RBM47阴性对照(Ad-eGFP)组.RT-qPCR检测各组细胞miR-205-5 p、RBM47 mRNA表达水平;用CCK-8法检测各组细胞增殖活性;Transwell小室法检测细胞迁移侵袭能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测各组细胞RBM47、侵袭迁移相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)及锌指E-盒结合同源异形盒1(ZEB1).双荧光素酶活性实验验证miR-205-5 p与RBM47的靶向关系.将miR-205-5 p-inhibitor与RBM47干扰载体(si-RBM47)及空载体(si-RNA-NC)共转染,分为miR-205-5p-inhibitor+si-RBM47组、miR-205-5p-inhibitor+si-RNA-NC组、miR-205-5 p-NC+si-RBM47组、miR-205-5 p-NC+si-RNA-NC组、未转染组(空白对照组),并检测各组细胞转染后侵袭迁移能力.结果 与HET-1A细胞系相比,ESCC细胞系(TE14和KYSE70)中miR-205-5p表达升高(P<0.05),RBM47 mRNA表达降低(P<0.05),在KYSE70细胞系中,miR-205-5 p表达最高,RBM47 mRNA表达最低,选用KYSE70细胞系进行后续试验.抑制miR-205-5 p或激活RBM47表达后,与空白对照组比较,miR-205-5 p-inhibitor组及Ad-RBM47组细胞增殖活性、侵袭迁移能力、ZEB1蛋白表达降低(P<0.05),RBM47、E-cadherin表达升高(P<0.05);miR-205-5p-NC组及Ad-eGFP组上述指标与空白组对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).miR-205-5 p-inhibitor与si-RBM47共转染后,与空白组对照组比较,miR-125b-NC+si-RBM47组细胞侵袭迁移能力升高(P<0.05);miR-205-5 p-inhibitor+si-RNA-NC组细胞侵袭迁移能力降低(P<0.05).与miR-205-5 p-inhibitor+si-RNA-NC组相比,miR-205-5 p-inhibitor+si-RBM47组细胞侵袭迁移能力升高(P<0.05);miR-125b-NC+si-RNA-NC组与空白对照组相比,上述指标差异无统计学意义(P>0.05).双荧光素酶活性试验显示,与miR-205-5 p-NC+RBM47-3′UTR-WT组比较,miR-205-5 p-mimics+RBM47-3′UTR-WT组荧光素酶活性降低(P<0.05),miR-205-5p-NC+RBM47-3′UTR-MUT组、miR-205-5p-mimics+RBM47-3′UTR-MUT组荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05),miR-205-5p与RBM47有结合位点,且呈靶向负调控作用.结论 Escc细胞中miR-205-5 p表达升高,RBM47表达降低,下调miR-205-5 p表达可抑制Escc细胞侵袭迁移能力,可能与上调RBM47表达有关.