miRNA-6516-5p通过靶向ODC1调控肾癌细胞的增殖和迁移
International Journal of Surgery(2022)
Abstract
目的:探讨微小RNA(miRNA)-6516-5p在肾癌细胞系中的表达及调控肾癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞系和正常近端肾小管上皮细胞系中miR-6516-5p的表达。用脂质体法分别将miR-6516-5p模拟物和无意义序列(NC)瞬时转染至miR-6516-5p表达最低的肾癌细胞,即miR-6516-5p组和NC组。qRT-PCR检测转染细胞miR-6516-5p的表达。CCK-8法和Transwell迁移实验检测转染细胞的增殖和迁移。生物信息学软件和双荧光素酶基因报告实验分别预测和验证miR-6516-5p对靶基因的调控。qRT-PCR和Western blotting法分别检测转染细胞中靶基因的表达。计量资料以均数±标准差(
±
s)表示,两组间比较采用
t检验,多组间比较采用单因素方差分析。
结果:miR-6516-5p在肾癌细胞系中的表达均明显低于正常近端肾小管上皮细胞(
P<0.01),786-O细胞中miR-6516-5p的表达最低(
F=27.69,
P<0.01)。NC组和miR-6516-5p组786-O细胞中miR-6516-5p的表达分别为1.01±0.08和9.91±1.16,与NC组比较,miR-6516-5p组786-O细胞中miR-6516-5p表达明显增加(
t=7.63,
P<0.01)。上调miR-6516-5p能显著抑制786-O细胞的增殖(
P<0.05)。NC组和miR-6516-5p组细胞迁移数分别为(85.65±8.77)个和(28.05±6.20)个,过表达miR-6516-5p可抑制786-O细胞的迁移(
t=5.36,
P<0.01)。miR-6516-5p的靶基因可能是鸟氨酸脱羧酶1(
ODC1),miR-6516-5p能显著抑制野生型ODC1-3′UTR的荧光素酶活性(
t=9.83,
P<0.01)。上调miR-6516-5p可降低786-O细胞中ODC1 mRNA和蛋白的表达(
P<0.01)。
结论:miR-6516-5p在肾癌细胞系中表达降低,miR-6516-5p通过靶向ODC1抑制肾癌786-O细胞的增殖和迁移,miR-6516-5p可能成为肾癌潜在的分子靶点。
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Key words
Kidney neoplasms,miR-6516-5p,Ornithine decarboxylase 1,Cell proliferation,Cell migration
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