腺苷受体及其介导的cAMP/PKA/CREB信号通路在高氧致早产大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的作用

目的 探讨高氧对早产大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cells,AECⅡ)腺苷受体及其介导的环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/蛋白激酶 A(protein kinase A,PKA)/cAMP 反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)信号通路的影响.方法 取早产SD大鼠肺组织分离培养原代AECⅡ,分为常氧组和高氧组,分别在氧气浓度21％和95％条件下培养.采用CCK-8法检测细胞培养6、12、24、48、72 h时AECⅡ增殖的光密度值.分别取培养12、24、48 h时2组原代AECⅡ,采用实时荧光定量PCR法检测细胞腺苷受体A1、A2A、A2B、A3 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞腺苷受体A1、A2A、A2B、A3蛋白及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量,采用ELISA法检测细胞cAMP水平.结果 培养6 h时,高氧组原代AECⅡ细胞增殖的光密度值(0.69±0.01)与常氧组(0.68±0.02)比较差异无统计学意义(t=-0.698,P=0.520);培养12、24、48、72 h时,高氧组原代 AECⅡ 细胞增殖的光密度值(0.67±0.01、0.58±0.01、0.47±0.01、0.30±0.01)均低于常氧组(0.71±0.02、0.76±0.01、0.97±0.01、1.26±0.02)(P＜0.05),随培养时间延长,高氧组原代AEC Ⅱ细胞增殖的光密度值逐渐降低(P＜0.05);培养24、48 h时,高氧组原代AECⅡ细胞腺苷受体A1、A3 mRNA和蛋白相对表达量均低于常氧组(P＜0.05),A2A、A2B mRNA和蛋白相对表达量均高于常氧组(P＜0.05);培养12、24、48 h时,随培养时间延长,高氧组原代AECⅡ腺苷受体A1、A3 mRNA和蛋白相对表达量均逐渐降低(P＜0.05),A2A、A2B mRNA和蛋白相对表达量均逐渐增高(P＜0.05).培养12、24、48 h时,高氧组原代AECⅡ细胞cAMP水平及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量均高于常氧组(P＜0.05),随培养时间延长,高氧组原代AECⅡ细胞cAMP水平及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量逐渐增高(P＜0.05).结论 高氧呈时间依赖性抑制早产大鼠原代AECⅡ细胞增殖,通过调节腺苷受体表达,激活其下游cAMP/PKA/CREB信号通路参与高氧相关AECⅡ损伤.