菘蓝中咖啡酸氧甲基转移酶IiCOMT的克隆与表达分析

目的 克隆菘蓝Isatis indigotica中咖啡酸氧甲基转移酶(I.indigotica fortune caffeic acid O-methyltransferase,IiCOMT)编码基因,并进行生物信息学及表达分析.方法 采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆菘蓝IiCOMT的全长cDNA,进而通过PCR获得其基因组DNA序列.通过qRT-PCR检测IiCOMT在四倍体菘蓝和二倍体菘蓝各器官以及不同胁迫条件下的表达情况.结果 IiCOMT全长cDNA为1376 bp(GenBank登录号DQ115905),包含1个1092 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码363个氨基酸残基,其对应的DNA序列含有3个内含子,4个外显子.IiCOMT基因在2种倍性菘蓝的根茎叶均有表达,且四倍体菘蓝中的表达均高于二倍体.胁迫因素盐处理(NaCl)、冷处理(4℃)、水杨酸(salicylicacid,SA)、茉莉酸甲脂(methyl jasmonate,MeJA)、赤霉素(gibberellic acid,GA3)和脱落酸(abscisic acid,ABA)均能诱导IiCOMT表达水平上调.结论 IiCOMT的克隆及表达分析,为进一步阐明与咖啡酸氧甲基转移酶相关的四倍体菘蓝优良性状形成的分子机制奠定了基础.