粉防己碱增敏长春新碱通过MAPK信号通路诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡的分子机制研究

目的 阐明粉防己碱(tetrandrine)增敏长春新碱(vincristine)诱导胃癌SGC-7901/VCR 细胞凋亡的分子机制.方法 用不同浓度(0、2、4、6、8μmol/L)粉防己碱及不同浓度(0、50、100、150、200 nmol/L)长春新碱单用或联用处理SGC-7901/VCR细胞48 h,MTT实验检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡.Western blot 检测细胞凋亡相关蛋白 PARP-1、cleaved-Caspase 9、cleaved-Caspase 3、Bcl-2及MAPK信号通路相关蛋白P38、p-P38、JNK、p-JNK、ERK、p-ERK的表达.应用p38-MAPK抑制剂 SB203580、JNK-MAPK 抑制剂 SP600125或 ERK-MAPK 抑制剂 PD98059预处理 SGC-7901/VCR 细胞2 h,再以粉防己碱联用长春新碱处理48 h,测定细胞凋亡及相关蛋白表达.粉防己碱及长春新碱单用或联用处理SGC-7901/VCR细胞24 h,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞周期相关蛋白CDC2、p-CDC2的表达.结果 粉防己碱联用长春新碱导致SGC-7901/VCR细胞增殖活力以剂量依赖的方式下降,联合作用效果为协同.联合用药导致细胞凋亡显著增加(P＜0.05),与PARP剪切激活及Caspase 9、Caspase 3裂解激活有关.联合用药增强细胞MAPK信号通路p-P38和p-JNK表达,减弱p-ERK表达,应用p38-MAPK或JNK-MAPK通路抑制剂预处理SGC-7901/VCR细胞后减弱联合用药诱导凋亡的作用(P＜0.05),而应用ERK-MAPK通路抑制剂预处理后增强联合用药诱导凋亡的作用(P＜0.05).联合用药导致SGC-7901/VCR细胞S/G2周期阻滞(P＜0.05).结论 粉防己碱增敏长春新碱抑制细胞增殖并诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡,MAPK信号通路可能在诱导细胞凋亡中起关键作用.