DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究

目的 探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells,RPASMCs)增殖中的作用及机制.方法 培养原代RPASMCs,采用3％O2缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型.采用小干扰RNA(small interfering RNA sequence,siRNA)敲低Dnase2a的表达,采用质粒过表达上调细胞中Dnase2a和Hif1a的表达.采用外源性加入线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)诱导细胞增殖,使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA作为HIF-1α激动剂上调细胞中HIF-1α的表达.采用MTS法检测各组细胞增殖能力,实时荧光定量PCR法检测Dnase2a的mRNA 表达,Western blot 法检测 DNase 2α、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和细胞周期蛋白(cell cycle protein D1,Cyclin D1)的表达.结果 缺氧可诱导RPASMCs增殖,并上调DNase 2α的表达(P＜0.05).siRNA可显著降低RPASMCs中Dnase2a的表达(P＜0.05),并显著增强缺氧诱导的RPASMCs增殖(P＜0.05),同时显著上调PCNA和Cyclin D1的蛋白表达(P＜0.05).过表达Dnase2a可显著上调RPASMCs中DNase 2α的表达(P＜0.05),并显著抑制缺氧诱导RPASMCs增殖(P＜0.05).外源性加入mtDNA可诱导RPASMCs增殖,而过表达Dnase2a可显著抑制mtDNA诱导的RPASMCs增殖(P＜0.05).过表达Hifla或使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA可显著上调HIF-1α表达,并显著上调DNase 2α的蛋白表达(P＜0.05).结论 DNase 2α可抑制缺氧或线粒体DNA诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,缺氧诱导的DNase 2α表达上调与HIF-1α有关.