miR-150-5p在糖尿病肾病模型小鼠肾组织中的表达和对小鼠足细胞MPC5损伤的影响及其机制

目的:探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在糖尿病肾病(DN)模型小鼠肾组织中的表达和对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤的作用,并阐明其作用机制.方法:20只昆明小鼠随机分为对照组(n=8,正常饲养)和DN组[n=12,高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建DN模型],采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组小鼠肾组织中miR-150-5p表达水平,采用免疫组织化学法和免疫荧光法观察2组小鼠肾组织中脑酸溶性蛋白1(BASP1)表达情况.采用不含干扰素-γ(IFN-γ)的培养基培养MPC5细胞2周,使其分化成熟,分为对照组和高糖处理(HG)组,HG组采用30 mmol·L-1 D-葡萄糖分别处理MPC5细胞12、24、48和72 h,采用RT-qPCR法和Western boltting法分别检测MPC5细胞中miR-150-5p和BASP1 mRNA及蛋白表达水平.采用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验评估miR-150-5p与BASP1是否具有靶向关系.将miR-阴性对照(NC)、miR-150-5p模拟物(mimic)、miR-150-5p mimic+阴性对照质粒(pc-DNA3.1-SC)和miR-150-5p mimic+BASP1过表达质粒(pc-DNA3.1-BASP1)分别转入已分化成熟的MPC5细胞,分为正常条件+miR-NC(Con+NC)组、HG条件+miR-NC(HG+NC)组、HG条件+miR-150-5p mimic(HG+mimic)组、HG条件+miR-150-5p mimic+pc-DNA3.1-SC(HG+mimic+SC)组和HG条件+miR-150-5p mimic+pc-DNA3.1-BASP1(HG+mimic+BASP1)组;采用CCK-8法检测各组MPC5细胞活性,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组MPC5细胞中活性氧(ROS)水平和乳酸脱氢酶(LDH)活性,采用流式细胞术检测各组MPC5细胞凋亡率.结果:与对照组比较,DN组小鼠肾组织中miR-150-5p表达水平明显降低(P<0.01),BASP1蛋白表达量明显增加,且BASP1与足细胞存在共定位.与对照组比较,HG组MPC5细胞中BASP1蛋白表达水平明显升高(P<0.01),miR-150-5p表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01).BASP1是miR-150-5p的直接靶点.与Con+NC组比较,HG+NC组MPC5细胞活性明显降低(P<0.01),ROS水平、LDH活性和细胞凋亡率均明显升高(P<0.01);与HG+NC组比较,HG+mimic组和HG+mimic+SC组MPC5细胞活性明显升高(P<0.01),ROS水平、LDH活性和细胞凋亡率均明显降低(P<0.01);与HG+mimic+SC组比较,HG+mimic+BASP1组MPC5细胞活性明显降低(P<0.01),ROS水平、LDH活性和细胞凋亡率均明显升高(P<0.01).结论:miR-150-5p表达降低可能是DN模型中足细胞损伤的机制之一.过表达miR-150-5p可通过靶向BASP1抑制HG诱导的足细胞损伤.