表面活性肽在大肠杆菌中的异源表达

为构建新型表面活性肽的表达载体,并探讨其在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化,将编码新型活性肽A6 K的重复DNA片段(A6 K)15分别插入到4中不同的原核表达载体中,经酶切和测序验证后,转化到3种不同的表达宿主进行表达,通过改变异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度、诱导温度和时间来优化表达条件.表达产物通过镍-次氮基三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)螯合层析进行纯化,通过(A6K)15上的6×His与抗体特异性结合进行Western blot分析,用二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)法测定产物浓度,进行经济效益分析.构建了含有目的基因(A6 K)15的重组表达质粒,筛选出最优载体pET-28a-SUMO-(A6K)15和最优宿主BL21(DE3).当IPTG终浓度为1.0 mmol/mL,诱导温度为30℃,时间为12 h时,表面活性肽(A6K)15的表达量最高,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel e-lectrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鉴定含有此新型小分子多肽(A6K)15.该研究成功构建了新型表面活性肽(A6K)15表达载体,并得到其最优表达条件,使其大量表达及纯化,为生物方法制备新型表面活性肽提供了思路.