猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其主要抗原蛋白的原核表达

2021年3月,山东省龙口市某养猪场发生了一起以败血症为主要临床症状的烈性传染病.为对引起此次疫病的病原进行确诊,无菌采集发病死亡仔猪的肝脏、脾脏等脏器进行染色镜检、病原分离培养、生化鉴定及PCR检测.结果显示,本次分离株的形态结构、培养特性及生化结果与多杀性巴氏杆菌较为一致,且可特异性扩增出多杀性巴氏杆菌特异性基因Kmt,因此本次分离菌株为一株猪源多杀性巴氏杆菌,命名为LK01.随后,对该分离株的5个主要抗原蛋白基因(OmpH、OmpA、AspA、pIpE和TAA)进行克隆与原核表达.先将PCR成功扩增出的目的片段与双酶切回收后的pCold-I载体进行同源重组连接,测序结果正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,随后经IPTG诱导后进行Western blot检测.结果显示,在30.0、21.5、52.0、37.5和45.5 kDa处出现特异性条带,表明各重组蛋白均成功表达.本研究为开展猪源多杀性巴氏杆菌病的流行病学研究,开发新型重组疫苗与诊断试剂奠定了基础.