miR-146a调控脂肪间充质干细胞成骨分化的机制

背景:既往研究表明,miR-146a能影响骨髓间充质干细胞成骨分化,但其在脂肪间充质干细胞成骨分化中的调节功能尚未阐明.目的:探究miR-146a对小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化的调控作用.方法:获取雄性C57BL/6小鼠脂肪间充质干细胞,采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞学方法检测第3代细胞CD29、CD44、CD45的表达,然后用miR-NC、miR-146a mimics和miR-146a inhibitor转染脂肪间充质干细胞并进行成骨诱导分化,成骨诱导第6天,采用碱性磷酸酶染色观察钙化程度,RT-PCR和Western blot检测成骨表型标志物的表达;成骨诱导第12天,采用茜素红染色鉴定细胞表面矿化基质的产生.结果 与结论:①培养的细胞为长梭形,呈成纤维样生长,第3代细胞CD29、CD44高表达,CD45低表达;②随着成骨诱导时间的延长,小鼠脂肪间充质干细胞miR-146a的表达逐渐降低(P<0.05);③与miR-NC组相比,碱性磷酸酶显色及其活性在miR-146a mimic组显著减弱,而在miR-146a inhibitor组显著增强(P<0.05);④与miR-NC组相比,ALP、Runx2、Akt、PI3K的mRNA和蛋白表达及p-Akt与p-PI3K的蛋白表达在miR-146a mimic组显著降低,而在miR-146a inhibitor组显著升高(P<0.05);⑤与miR-NC组相比,茜素红染色发现miR-146a mimic组细胞的钙化程度显著降低(P<0.05),而miR-146a inhibitor组的钙化程度显著升高(P<0.05);⑥上述结果表明,miR-146a能够通过PI3K/AKT信号通路负向调控脂肪间充质干细胞向成骨细胞分化.