补肾调肝方含药血清促进大鼠软骨细胞自噬治疗关节炎

背景:前期研究发现,补肾调肝方治疗骨关节炎有明显临床疗效,但缺乏对其作用机制的研究.目的:观察补肾调肝方含药血清对大鼠软骨细胞自噬的影响,并探讨其内在机制.方法:传代培养的第3代大鼠软骨细胞随机分为4组:二甲基亚砜组、10μg/L白细胞介素1β组、10μg/L白细胞介素1β+10％补肾调肝方含药血清组和雷帕霉素5μmol/L组,分别处理软骨细胞24 h.单丹磺酰尸胺染色法检测软骨细胞自噬小体表达;实时荧光定量PCR检测自噬相关基因ATG5、ATG7 mRNA的表达;Western blot检测Beclin1、LC3A/B和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白表达水平.结果 与结论:①与二甲基亚砜组比较,10μg/L白细胞介素1β组中细胞的自噬小体数量明显减少;雷帕霉素处理后的软骨细胞与二甲基亚砜组相比,自噬小体的数量明显增多;与10μg/L白细胞介素1β组相比,10μg/L白细胞介素1β+10％补肾调肝方含药血清组的自噬小体明显增多;②实时荧光定量PCR及Western blot结果显示,与二甲基亚砜组比较,10μg/L白细胞介素1β组中软骨细胞自噬相关基因ATG5、ATG7 mRNA及Beclin1和LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ蛋白表达水平均明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05),而p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显上升(P<0.05,P<0.05);与二甲基亚砜组相比,雷帕霉素处理后的软骨细胞中ATG5、ATG7 mRNA及Beclin1和LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ蛋白表达水平均明显上升(P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.05),而p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显下降(P<0.01,P<0.01);与10μg/L白细胞介素1β组相比,10μg/L白细胞介素1β+10％补肾调肝方含药血清组中软骨细胞自噬相关基因ATG5、ATG7 mRNA及Beclin1和LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ的蛋白表达水平均明显上升(P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.01),而p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显下降(P<0.05,P<0.05);③提示补肾调肝方含药血清可能通过抑制软骨细胞内AKT/mTOR信号通路增加软骨细胞的自噬能力,延缓关节软骨退变,起到治疗骨关节炎的作用.