选择性瞬变感受器电位蛋白V4激动剂GSK1016790A对轴突再生的影响

背景:选择性瞬变感受器电位蛋白V4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)激动剂GSK1016790A能够在短时间内激活TRPV4蛋白,表现为Ca2+内流,而蛋白表达量不变.但是在培养过程中,GSK1016790A会使HeLa细胞膜表面TRPV4表达降低,这一现象对神经再生是否产生影响仍不清楚.目的:探究TRPV4激动剂GSK1016790A在不同时期内对神经元轴突再生的影响.方法:取6-8周龄ICR小鼠背根神经节,经过胶原酶和胰酶处理使细胞充分解离,进行背根神经节细胞培养.在培养初期加入GSK1016790A刺激2 h后去除激动剂继续培养3 d,或者加入GSK1016790A持续处理3 d;空白对照组不进行任何处理.采用免疫印迹法检测TRPV4蛋白表达以及轴突再生相关蛋白表达,同时进行TUJ1和TRPV4免疫荧光染色,观察轴突分叉数目、轴突再生长度、细胞存活数变化.结果 与结论:①与空白对照组相比,GSK1016790A刺激神经细胞2 h后,TRPV4蛋白变化无明显差异(P>0.05);而刺激神经细胞3 d后TRPV4表达明显降低(P<0.05);②与空白对照组相比,GSK1016790A刺激神经细胞2 h后,轴突分叉数目及轴突长度无明显差异(P>0.05);而刺激神经细胞3 d后轴突分叉数目及轴突长度均明显增加(P<0.05);③与空白对照组相比,GSK1016790A刺激神经细胞2 h或3 d后,细胞存活率均无明显改变;④与空白对照组相比,GSK1016790A刺激神经细胞3 d后,PTEN蛋白表达降低(P<0.05),神经轴突再生显著,这一过程可能经抑制PTEN蛋白表达介导的.