基于重组EP153R蛋白的检测非洲猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法的建立
Chinese Journal of Veterinary Parasitology（2022）
Abstract
为探究非洲猪瘟病毒(ASFV)EP153R蛋白的功能和建立ASFV抗体间接ELISA方法,本试验构建了EP153R蛋白杆状病毒表达系统,采用Western blot与IFA鉴定rEP153R蛋白的表达和免疫原性.结果显示,杆状病毒能高效表达rEP153R蛋白且可被小鼠多克隆抗体识别,具有良好的免疫原性.以此重组蛋白为抗原进行间接ELISA方法的建立,经方阵ELISA确定当抗原包被量2.5μg/mL,ASFV阳性血清稀释比1:1000时为最佳反应条件;以优化后的条件确定了抗体阳性临界值为0.259;特异性试验结果表明,该方法仅与ASFV阳性血清发生反应,具有较强的特异性;重复性试验结果显示变异率小于10％,重复性良好.利用该方法对46份猪血清进行检测,与商品化试剂盒检测结果对比显示,符合率为91.3％,能较好的区分ASFV阴性血清与阳性血清.本研究的结果为后续EP153R功能研究和ASFV临床血清学诊断奠定了基础.
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