PCY1-2m嵌合病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及其初步应用

为确定感染性克隆质粒免疫小鼠拯救获得的病毒量与诱导抗体之间的关系,以选择最佳免疫剂量,本研究建立了一种快速、灵敏的TaqMan荧光定量PCR检测方法.根据pcDNA3.1(+)-PCV1-2m-V5质粒的ORF2和V5标签序列设计特异性引物和探针,并将该质粒作为阳性标准品,优化荧光定量PCR条件后,按10倍倍比稀释,建立标准曲线,进行灵敏性、特异性和稳定性验证;而后,应用该方法对免疫不同质粒浓度的6组小鼠,分别在免疫后1?9周进行病毒血症检测;同时,应用ELISA方法分别对PCV2抗体滴度进行检测.结果表明,试验建立的荧光定量PCR方法具有良好的灵敏性、特异性和稳定性,检测范围可达1.29×101?1.29×109拷贝/μL;病毒血症可持续至第5周,抗体可维持至第8周.通过分析抗体滴度变化与病毒载量消长关系,确定使用200 μg作为小鼠的最佳免疫剂量.本试验为感染性克隆质粒进一步在本体动物(猪)体内评估免疫效果奠定基础.