基于GP64单抗的重组杆状病毒滴度测定方法的建立及应用

杆状病毒表达系统是表达重组蛋白的首选真核表达系统之一,该系统通过表达目标蛋白的重组杆状病毒感染昆虫细胞,可以产生大量的生物活性蛋白.在重组杆状病毒生产过程中,为了获得高表达的重组蛋白,需要准确地测定病毒滴度.当前已有的滴度测定方法耗时较长,或仅限于表达报告基因的病毒.本研究利用前期获得的GP64单克隆抗体,针对表达猪细小病毒(porcine parvovirus virus,PPV)VP2蛋白的重组杆状病毒进行滴度测定,通过对GP64单抗、HRP羊抗鼠二抗、山羊血清稀释比例的优化,初步建立了一种杆状病毒滴度测定方法.结果显示,GP64单抗的最佳稀释比例为1:500～1:1 000,二抗的最佳稀释比例为1:250～1:500,山羊血清的最佳稀释比例为1:30?1:50.该方法测定的5种不同病毒滴度与商品化试剂盒测定的滴度差异不显著,表明初步建立了一种高效稳定的杆状病毒滴度测定方法,为杆状病毒表达系统生产重组蛋白奠定基础.