多房棘球绦虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立高效、特异的多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,E.m)检测方法,本研究设计了1组基于E.m线粒体NADH脱氢酶亚基3(NADH3)基因的特异性引物和TaqMan探针,通过对反应体系及条件进行优化,建立了E.m荧光定量PCR检测方法.结果 显示,该方法线性关系好,灵敏度高,在109～101拷贝/μL相关系数达0.998,灵敏度达10拷贝/μL;在特异性试验中,与其他病原虫株无交叉反应,特异性较好;重复性试验(组间和组内)的变异系数均小于3％.应用建立的方法对采集的50份临床样品进行检测,发现9份为E.m感染阳性.由此可见,建立的荧光定量PCR方法可用于泡型包虫病(alveolar echinococcosis,AE)的快速检测、定量分析及流行病学调查.