肠炎沙门氏菌SEF14菌毛的表达及其对该菌的特异性检测研究

为获得肠炎沙门氏菌SEF14菌毛蛋白并检测其生物学功能,本研究以肠炎沙门氏菌标准株SE50336为模板,PCR扩增其含分泌信号肽的sef14操纵子基因片段,并克隆至表达载体pBR322中,构建重组质粒pBR322-sef14,将该重组质粒转化至经修饰且不含任何菌毛的大肠杆菌SE5000M株中,获得重组菌pBR322-sef14/SE5000M.将重组菌pBR322-sef14/SE5000M与本实验室制备的SefA(SEF14菌毛的主要亚基)单克隆抗体(MAb)凝集;利用透射电镜和免疫电镜观察上述重组菌并通过SDS-PAGE和western blot鉴定,利用该重组菌pBR322-sef14/SE5000M与肠炎沙门氏菌阳性鸡血清及其他菌的阳性鸡血清结合.结果显示,本实验室制备的SefA MAb能够特异性识别该重组菌,并产生明显的肉眼可见的凝集反应.重组菌表达的SEF14菌毛产物大小约为14.3 ku,与菌毛的主要亚基SefA的大小一致,电镜观察到重组菌表面有明显的菌毛结构.在肠炎沙门氏菌特异性靶向检测中,该重组菌表达的菌毛蛋白仅与肠炎沙门氏菌阳性鸡血清反应,能够在2min内用肉眼观察到清晰的凝集颗粒,而不与鸡白痢、鸡伤寒、鼠伤寒沙门氏菌阳性鸡血清反应.本研究首次克隆了肠炎沙门氏菌sef14操纵子基因并在体外成功表达并进行了功能鉴定,上述研究结果为进一步研究SEF14菌毛及建立特异性诊断技术提供基础.