,斑丹毒丝菌SpaA的分段克隆及表达

为筛选表达量高且免疫原性强的红斑丹毒丝菌表面保护性抗原A(SpaA)的抗原片段,本研究根据该菌SpaA的结构和功能区将其设计为6个子片段和1个全长片段,采用PCR技术从红斑丹毒丝菌HG-1菌株中扩增出SpaA的7个抗原基因片段,利用原核表达系统克隆并表达后采用SDS-PAGE和western blot检测表达及纯化情况.结果显示,获得7个重组蛋白,分别命名为rSpaA1～rSpaA7,其表达量占菌体总蛋白的17.44％～25.38％,其中rSpaA1、rSpaA2、rSpaA5以包涵体形式表达,rSpaA3以可溶性蛋白形式表达,而rSpaA4、rSpaA6、rSpaA7两种表达形式同时存在.纯化后,rSpaA1～rSpaA7的纯度介于84.22％～93.72％,浓度为0.89 mg/mL～3.25 mg/mL.Western blot 结果显示,7个重组蛋白均显示出良好的反应原性,其中rSpaA1、rSpaA3、rSpaA4的反应原性更强.本研究实现了对红斑丹毒丝菌SpaA的分段及其全长的表达和纯化,为SpaA保护性抗原片段的筛选及猪丹毒亚单位疫苗的研发奠定基础.