不同发育阶段牦牛睾丸组织miRNA的分析及鉴定

选取胎儿期(4～5月龄)、犊牛期(1岁)、性成熟期(3岁)的健康雄性牦牛各2头,分离其睾丸组织,利用Illumi-na平台对各样本miRNA进行测序,其中同一年龄段的2个样本被视为生物学重复;分析各阶段样本的miRNA数量、碱基偏好性和表达水平,对新miRNA进行预测,对显著差异表达的miRNA的靶基因进行gene ontology(GO)富集分析.结果 显示,胎儿期miRNA占small RNA(sRNA)的比例显著多于犊牛期和性成熟期(P＜0.05).共发现新miRNA成熟体77个,新miRNA前体共80个,已知miRNA的首位具有尿嘧啶(U)碱基偏好性,新miRNA的首位具有胞嘧啶(C)碱基偏好性.差异表达分析发现胎儿期与犊牛期间显著差异表达miRNA共224个,犊牛期与性成熟期间显著差异表达miRNA共36个,胎儿期与性成熟期间显著差异表达miRNA共239个.GO分析发现显著差异表达的miRNA其靶基因的数目在生物学过程排首位的是代谢过程,并从显著差异表达的miRNA的靶基因中筛选出了与精子发生及与精子功能相关的靶基因20个.结果 表明,牦牛睾丸发育过程中,胎儿期的miRNA的数量及部分miRNA的表达水平与胚后阶段相比有明显的差异;新miRNA与已知miRNA相比可能存在未知加工机制;不同发育阶段牦牛睾丸之间部分显著差异表达的miRNA可能通过调控其靶基因的表达进而参与精子发生.