尼帕病毒受体结合糖蛋白在哺乳动物细胞中的可溶性表达和纯化及小鼠抗血清制备

参照GenBank中尼帕病毒受体结合蛋白(G蛋白)编码序列,使用DNAStar软件对各基因型尼帕病毒G蛋白进行核苷酸、氨基酸同源性分析,并绘制进化树,选择代表性毒株(NCBI登录号:AF212302.2),截取合成G蛋白头部结构域(sG)的核苷酸序列,连接至pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建为重组质粒pcDNA-sG,将测序正确的重组质粒在Expi293F细胞中进行表达,利用蛋白免疫印迹(Western blot)进行鉴定.通过Strep-Tactin XT亲和层析纯化目的 蛋白,薄层扫描分析蛋白纯度.用获得的sG免疫小鼠制备抗sG蛋白的多克隆抗体血清,并通过间接ELISA鉴定结合活性.结果 显示,尼帕病毒G蛋白在Expi293F细胞中获得可溶性表达,纯化得到的目的 蛋白大小正确,纯度大于99％;制备的抗血清能特异性结合目的 蛋白.