马驽巴贝斯虫PCR和qPCR检测方法的建立

马驽巴贝斯虫是一种寄生于马属动物的血液原虫,给马产业造成巨大的经济损失.本研究旨在建立两种高效、可靠的PCR诊断技术,为进一步提高口岸检疫工作效率奠定基础.根据马驽巴贝斯虫Bc48基因序列,设计了一对特异性引物和荧光探针,建立了PCR和qPCR检测方法,测试了两种方法的特异性、灵敏性、稳定性.结果显示:建立的两种方法均具有良好的特异性;PCR方法的最低检出限为4.04×102 copies/μL,qPCR方法的最低检出限为4.04×101 copies/μL;对33份马血样品进行检测,结果qPCR检出的阳性样品数为23份(69.7％),而PCR检出的阳性样品数为9份(27.3％).表明两种方法均可成功用于马驽巴贝斯虫的检验,但是荧光定量PCR方法的灵敏度明显优于PCR方法.