过表达YY1对水牛早期胚胎发育及DNA甲基化的影响

为了解阴阳因子1(YY1)在水牛植入前胚胎中的表达规律及其对早期胚胎发育和DNA甲基化的影响,本研究通过受精卵卵胞质注射的方法,将线性化处理的过表达YY1质粒注射到体外受精8～10 h的水牛受精卵中,分析其对水牛早期胚胎发育的影响,并在胚胎发育各个时期检测该基因的表达.同时通过qRT-PCR检测过表达YY1对DNMT1表达的影响来研究DNA甲基化水平.qRT-PCR结果表明,YY1和DNMT1在水牛植入前胚胎的表达模式呈相反的趋势,YY1的表达随着胚胎的发育逐渐增高,囊胚期达到最高,而DNMT1基因在桑葚胚前表达较高,囊胚期表达最低.与空白对照组相比,注射25 μg/mL质粒对水牛囊胚发育率无显著影响(P＞0.05),取得较高的表达EGFP囊胚(33.3％),显著高于5、15、50μg/mL处理组(P＜0.05);处理组与空白对照组的胚胎分裂率、囊胚发育率、囊胚基因表达率差异均不显著(P＞0.05).过表达YY1胚胎在体外受精12d后仍有囊胚产生.与空白对照组相比,处理组各时期胚胎中YY1和DNMT1表达量均有明显的增加.以上结果表明,过表达YY1对体外受精早期胚胎发育没有影响,但会延迟囊胚的形成.