基于非洲猪瘟病毒p72蛋白的阻断ELISA检测方法的建立及初步应用

本研究以真核表达的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白为包被抗原,以抗ASFV p72蛋白的特异性单克隆抗体为检测抗体,经条件优化,建立了特异性检测ASFV抗体的阻断ELISA方法.结果 显示,最佳抗原包被量为100 ng/孔,待检血清样本最佳稀释度为1:2,酶标抗体最佳稀释度为1∶10000.该阻断ELISA方法的结果判定标准:当血清样品的PI≥41.84％时,判定为阳性;当血清样品的PI＜41.84％时,判定为阴性.特异性试验结果显示,该方法仅能与非洲猪瘟病毒阳性血清反应,与PRV、PCV2、PRRSV、CSFV和PPV等猪病疫苗毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法最低能检出1∶128稀释的阳性血清;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10％;与商品化ELISA试剂盒的对比检测结果表明,两种方法的符合率为100％.上述结果表明,本研究建立的基于ASFV p72蛋白的阻断ELISA方法可以应用于ASFV抗体的检测,为ASFV流行病学调查及疫情监测提供了有效的检测手段.