不同缺氧方法对肉鸡肺动脉平滑肌细胞MIF表达的影响

为了探讨不同缺氧方法对肉鸡肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)表达的影响,试验以常氧培养组为对照,不同浓度(400,500,600,700,1 000 pmol/L)氯化钴(CoCl2)处理鸡PASMCs不同时间(12,24,48 h),不同强度物理缺氧,即绝对缺氧(向物理缺氧装置Hypoxic incubator通入100％N2)和相对缺氧(向Hypoxic incubator 通入3％ O2、5％ CO2、92％ N2)12,24,48 h,采用qRT-PCR、Western-blot检测法,以低氧诱导因子(hypoxia inducible factor lo,HIF-lα)的表达为缺氧标志,利用Hypoxic incubator和化学缺氧模拟剂CoCl2,构建肉鸡PASMCs缺氧模型;同时,检测缺氧条件下鸡PASMCs中MIF表达的变化,并对不同缺氧模型进行比较.结果表明与常氧对照(0 h)相比,700 μmol/L CoCl2处理24 h后PASMCs中HIF-lα及MIF的表达均极显著增加(P<0.01);与常氧对照(0 h)相比,绝对缺氧和相对缺氧48 h,HIF-lα及MIF的表达量均显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01);将700 μmol/L CoCl2处理24 h、绝对缺氧(100％ N2缺氧48 h)和相对物理缺氧(3％O2、5％CO2、92％ N2缺氧48 h)样品放在一起进行统一检测比较,相对物理缺氧PASMSs MIF mRNA的相对表达量最高.说明700 μmol/L CoCl2处理24 h,或绝对缺氧48 h,或相对缺氧48 h,均可成功构建鸡PASMCs缺氧模型,并且相对物理缺氧模型优于其他两种模型,能更好反映体内慢性缺氧条件下MIF的变化.缺氧可明显促进鸡PASMCs中MIF的表达,提示缺氧影响PASMCs分泌MIF,进而可能影响细胞的增殖.