原花青素B2对猪颗粒细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

为研究原花青素B2(GSPB2)对猪颗粒细胞氧化损伤的保护作用,采用原代细胞培养的方法,建立H2O2致颗粒细胞氧化损伤模型,同时用不同浓度GSPB2进行干预.采用TUNEL方法检测细胞凋亡,利用荧光染色法观察细胞内活性氧(ROS)变化,使用比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,采用定量PCR方法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas、Puma、Sirtl的mRNA表达水平,应用Western blot方法检测衰老相关分子Sirt1、p16和p21蛋白水平.结果显示,200 μmol/L H2O2处理12 h,可致细胞凋亡和ROS水平显著升高(P＜0.05),SOD、CAT和GSH-Px活性下降,MDA含量增加;10 μmol/L GSPB2能显著减轻H2O2所致上述状况;且进一步研究发现,GSPB2抑制Fas和Puma的表达,提高Bcl-2/Bax表达比例,上调Sirt1蛋白、下调p16和p21蛋白的表达.综上,GSPB2对猪颗粒细胞的氧化损伤具有保护作用,其机制可能与上调Sirt1蛋白、下调p16和p21蛋白表达,提高Bcl-2/Bax比值,抑制Fas、Puma表达有关.