转基因玉米品系及转化体成分四重实时荧光PCR快速鉴定

Bt11转基因玉米品系是耐除草剂抗虫玉米,MIR162和Mon89034是鳞翅目昆虫抗性的单抗虫玉米,均是国内外出入境监管主要关注的转基因玉米品系.本研究通过靶标基因筛选、转基因阳性样品采集、核酸样本制备、多重引物和荧光探针组合筛选、反应体系优化以及方法学验证等过程开发建立了四重荧光定量PCR检测技术.结果表明该技术的使用可实现一个反应管中同时检测MIR162、Bt11、Mon89034三个玉米品系的特异性基因序列和一个编码玉米淀粉合成酶异构体zSTSⅡ-2(zSSⅡb)玉米内源基因.通过阳性对照,阴性对照和空白对照特异性S曲线与对应的阈值大小分析可判定样品中是否含有这三个转基因玉米品系及其转化体成分.经方法学特异性检测,结果与转基因检测金标准的单实时荧光PCR结果一致;经平行样和灵敏度测试,最低检测限为18个拷贝;经标准曲线扩增分析,四个基因的扩增效率均在90％～110％范围内,扩增效果良好.该方法从DNA提取到报告结果不足3 h,可缩短检测时限,节约试剂耗材成本,操作简单易行,满足高通量特征,可为市场流通产品品系和转基因成分的实时监管和快速鉴定提供技术支撑.