在线抗氧化分析和超滤亲和液质联用技术快速筛选桂花抗氧化及抑制酪氨酸酶的活性成分

目的:研究桂花水提物的抗氧化活性及酪氨酸酶抑制活性,并初步研究其活性化学成分.方法:以DPPH·清除能力、ABTS+·清除能力和FRAP这3种抗氧化活性评价指标来衡量桂花水提物及其化合物的抗氧化能力;采用超高效液相-ABTS+·-质谱(UPLC-PDA-QDa-ABTS+·)在线法对桂花中的抗氧化活性成分进行定性鉴别,同时采用超滤亲和-液质联用技术(Ultra-filtration affinity-liquid chromatography spectrometry,UF-LC-MS),筛选桂花中的酪氨酸酶抑制剂.用H2O2致皮肤成纤维细胞氧化损伤模型,评价桂花水提物及其化合物对皮肤成纤维细胞的氧化应激保护作用.结果:桂花水提物清除DPPH·及ABTS+·的半数有效浓度(EC50)值分别为37.66和38.32μg/mL.当桂花浓度达到2 mg/mL时,FRAP值可高达3.17.桂花水提物抑制酪氨酸酶双酚酶的EC50为595.9μg/mL.通过UPLC-Triple-TOF/MS分析,初步鉴定了桂花水提物中28种化学成分.采用UPLC-PDA-QDa-ABTS+·在线法及UF-LC-MS技术,快速筛选出桂花提取物中5种具有较好抗氧化作用并兼具显著酪氨酸酶结合率的化学成分,鉴定其中主要的活性成分为毛蕊花糖苷.体外抗氧化和酪氨酸酶实验,验证了毛蕊花糖苷具有显著抗氧化活性及酪氨酸酶抑制活性.毛蕊花糖苷清除DPPH·及ABTS+·的EC50值分别为10.27和14.96μg/mL.当毛蕊花糖苷浓度达到1 mg/mL时,FRAP值可高达4.22.毛蕊花糖苷对酪氨酸酶单酚酶的EC50为477.5μg/mL,对双酚酶的抑制活性几乎没有.利用H2O2致皮肤成纤维细胞氧化损伤模型,进一步验证桂花提取物及毛蕊花糖苷对皮肤成纤维细胞氧化损伤具有显著保护作用.结论:桂花水提物及其主要活性成分毛蕊花糖苷具有很好的体外抗氧化能力、酪氨酸酶抑制活性及氧化应激保护能力.