氟暴露对NG108-15细胞凋亡及PKC-NMDAR信号通路的影响

目的 了解氟暴露对NG108-15细胞凋亡及蛋白激酶C/N-甲基-D-天冬氨酸受体(PKC-NMDAR)信号通路的影响.方法 将NG108-15细胞分别暴露于0(对照)、20、40、80 mg/L NaF 24 h后,观察NG108-15细胞形态,以CCK-8法检测NG108-15细胞活力,以吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察NG108-15细胞凋亡,以qRT-PCR检测细胞中PKC、NMDAR1、NMDAR2A、NMDA R2B的mRNA表达水平,以Western blot法检测细胞中PKC、NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的蛋白表达水平.结果 与对照组比较,染毒组细胞发生形态变化,细胞间隙变大,细胞突起变短甚至消失,细胞胞体变圆、萎缩,细胞数量逐渐减少,且80 mg/L NaF组较20 mg/L NaF组细胞形态改变明显.与对照组比较,各浓度NaF染毒组NG108-15细胞活力均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).AO/EB染色结果显示,与对照组比较,各染毒组NG108-15细胞凋亡率均升高,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组细胞核完整,显示为绿色荧光均一的正常形态,20 mg/L NaF组细胞核内出现黄色和橘红色染色质、可见细胞凋亡,40、80 mg/L NaF组凋亡细胞数量明显增加.与对照组比较,各浓度NaF染毒组NG108-15细胞中PKC、NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与20 mg/L NaF组比较,除40 mg/L NaF组NMDAR1外,40、80 mg/L NaF组NG108-15细胞中PKC、NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与40 mg/L NaF组比较,80 mg/L NaF组NG108-15细胞中PKC、NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2BmRNA表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,各浓度NaF染毒组NG108-15细胞中PKC、NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与20 mg/L NaF组比较,除40 mg/L NaF组NMDAR2B外,其他各染毒组NG108-15细胞中PKC、NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与40 mg/L NaF组比较,80 mg/L NaF组NG108-15细胞中NMDAR2A、NMDAR2B蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NaF染毒可降低NG108-15细胞活力,诱导NG108-15细胞凋亡,其机制可能与PKC、NMDAR表达受到抑制有关.