长链非编码RNA同源盒A簇反义RNA 2调控Zeste同源物增强子2表达对体外人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的:基于Zeste同源物增强子2(EZH2)探究长链非编码RNA(lncRNA)同源盒A簇反义RNA 2(HOXA-AS2)对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)成骨分化的影响及机制。方法:将体外培养hBMSC分为对照组(Control组)、si-NC组、HOXA-AS2沉默组、pcDNA3.1-NC组、HOXA-AS2过表达组、HOXA-AS2沉默+si-EZH2组共6组，转染24 h后采用hBMSC成骨分化培养基诱导成骨分化。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HOXA-AS2、EZH2 mRNA表达；茜素红染色观察钙结节的形成情况；碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒测量ALP活性；蛋白质印迹法(Western blot)检测EZH2、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)蛋白表达。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)。 结果:HOXA-AS2沉默组中ALP活性、RUNX2、OPN表达明显低于Control组(0.63±0.09比1.00±0.00， t＝5.610， P<0.05；0.27±0.04比0.48±0.06， t＝5.412， P<0.05；0.20±0.04比0.36±0.04， t＝5.032， P<0.05)，差异有统计学意义；EZH2 mRNA(2.65±0.14比1.00±0.00， t＝31.726， P<0.05)和蛋白(1.25±0.10比0.77±0.09， t＝10.182， P<0.05)表达明显高于Control组，差异有统计学意义。HOXA-AS2过表达组结果与HOXA-AS2沉默组相反。在沉默HOXA-AS2的基础上敲低EZH2的表达逆转了沉默HOXA-AS2对hBMSC成骨分化能力的抑制作用。 结论:过表达HOXA-AS2可能通过下调EZH2的表达，促进hBMSC成骨分化。