六味地黄汤通过调节AMPK/Akt/GSK3β/Nrf2通路减轻糖尿病抑郁大鼠vHIP髓鞘损伤及抑郁样行为

目的:观察六味地黄汤对糖尿病抑郁(DD)大鼠抑郁样行为的影响,并探讨其作用机制.方法:50只SPF级雄性SD大鼠采用高脂饮食喂养加尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法制备糖尿病模型,随后糖尿病大鼠予28d慢性不可预测的轻度应激(CUMS)的方法建立DD模型.随机分为5组,模型组,氟西汀组(10 mg·kg-1·d-1),六味地黄汤低、中、高剂量组(3.375,6.75,13.5 g·kg-1·d-1),每组10只.另取正常组10只,生理盐水灌胃.连续灌胃4周后,悬尾实验和旷场实验用于评估大鼠的抑郁表型,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测腹侧海马(vHIP)中丙二醛(MDA),活性氧(ROS),8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽(GSH);采用免疫荧光检测vHIP区域髓鞘碱性蛋白(MBP)表达,蛋白免疫印迹法检测MBP,髓鞘脂蛋白(PLP),髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)表达水平及通路蛋白磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶/腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK/AMPK),磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B(p-Akt/Akt),磷酸化糖原合成酶激酶3β/糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β/GSK3β),核因子E2相关因子2(Nrf2)表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠在悬尾实验中不动时间增加(P＜0.01),在旷场实验中,模型组大鼠中心区时间下降(P＜0.01).与模型组比较,中、高剂量六味地黄汤干预后,大鼠的不动时间均有不同程度的下降(P＜0.01),大鼠中心区时间明显增加(P＜0.05,P＜0.01).与正常组比较,模型组大鼠vHIP中髓鞘相关蛋白MBP,PLP,MOG蛋白表达降低(P＜0.01),与模型组比较,低剂量组MBP表达量增加(P＜0.05),MOG,PLP表达差异无统计学意义,氟西汀组、六味地黄汤中、高剂量组MBP,PLP,MOG蛋白表达增加(P＜0.05,P＜0.01).与正常组比较,模型组vHIP区域MBP荧光强度显著减少(P＜0.01);与模型组比较,六味地黄汤中、高剂量组及氟西汀组MBP荧光表达强度增加(P＜0.05,P＜0.01).与正常组比较,模型组SOD,GSH下降(P＜0.01),MDA,ROS,8-OHdG表达水平均有所增加(P＜0.01);与模型组比较,六味地黄汤中、高剂量组及氟西汀组MDA,ROS,8-OHdG表达水平均下调(P＜0.05,P＜0.01),SOD,GSH表达水平上调(P＜0.05,P＜0.01).与正常组比较,模型组大鼠p-AMPK,p-Akt,Nrf2表达下调,p-GSK3β表达增加(P＜0.01);与模型组比较,低剂量组p-AMPK蛋白表达明显增加(P＜0.05),p-Akt,Nrf2蛋白表达明显增加,但差异无统计学意义,中、高剂量组及氟西汀组p-AMPK,p-Akt,Nrf2蛋白表达上调,p-GSK3β蛋白表达下调(P＜0.05,P＜0.01).结论:六味地黄汤改善DD大鼠抑郁样行为,其机制可能是通过激活AMPK/Akt/GSK3β/Nrf2通路,影响vHIP的氧化应激状态,促进髓鞘修复.