一株鸭肝炎病毒的基因组序列及其VP1基因的多克隆抗体制备

[目的]确定福建某鸭场雏鸭以出现角弓反张和肝脏出现肿大并伴有密集出血点为主要病征的高死亡率病害的病原,并制备可特异性检测的多克隆抗体,以期为福建省鸭流行病学研究提供素材.[方法]取该鸭场病死鸭肝脏组织进行病毒的分离鉴定,并对病毒进行全基因测序.利用pGEX-4T-1载体构建该病毒优势抗原表位基因的高效表达系统,制备VP1多克隆抗体,并用Western-blotting检测其特异性.[结果]应用非免疫的鸭胚从疑似鸭病毒性肝炎的鸭肝脏中分离到1株病毒.该分离毒在鸭胚连续传6代后死亡率约为70％,且死胚尿囊液分别在鸭、鸡、小鼠和兔血液中均未出现血凝现象.注射分离毒的尿囊液的1日龄雏鸭死亡率达100％.RT-PCR扩增结果、全基因组测序结果表明分离毒为I型鸭病毒性肝炎病毒,毒株DQ226541.1的基因序列同源性达99.4％,其VP1氨基酸序列与毒株DQ226541.1氨基酸序列一致.将毒株命名为Fujian2015.成功构建重组质粒pGEX-4T-1-VP1,并制备了可特异性检测VP1蛋白的VP1多抗血清.[结论]成功分离到了1株I型鸭病毒性肝炎病毒,同时制备了该毒株的VP1多克隆抗体,为后续检测I型鸭病毒性肝炎病毒相关研究奠定了基础.