中华按蚊气味结合蛋白AsinOBP62基因的克隆、表达及与人体挥发物的结合特性

嗅觉系统在蚊虫追寻宿主、寻找配偶、选择产卵场所等行为中起着重要的作用,气味结合蛋白与气味分子结合是昆虫嗅觉识别的第一步生化反应.为研究中华按蚊气味结合蛋白在追寻宿主中的作用,通过反转录PCR (RT-PCR)克隆气味结合蛋白62 (odorant binding protein 62,AsinOBP62)基因,利用定量PCR分析AsinOBP62在不同组织(触角、喙、下颚须及头胸腹部)、不同发育时期(蛹期、羽化1d、3d)和吸血前后的表达水平,通过荧光竞争结合实验测定AsinOBP62蛋白与16种人体气味物质和2种趋避剂的结合能力.结果 显示,AsinOBP62基因开放阅读框长507 bp,编码168个氨基酸,具有气味结合蛋白典型的6个保守半胱氨酸残基,属于Classic亚家族成员.定量PCR结果显示,AsinOBP62主要在成蚊触角中表达,羽化后AsinOBP62的表达水平逐渐增强.吸食血液后,AsinOBP62的表达水平显著下降.荧光竞争结合实验显示,在测定的18种气味物质中,AsinOBP62与12种化合物具有结合活性,表明AsinOBP62对人体挥发物具有明显的选择性.其中,与2-甲基吡啶结合能力最强,解离常数Ki=34.34 pmol/L.根据AsinOBP62基因的表达特点和重组蛋白的结合特性,推断AsinOBP62基因可能在雌蚊追寻宿主的过程中起着重要的作用.