miR-486通过调控巨噬细胞表型分化抑制AngⅡ诱导的病理性心肌肥大

目的 探讨miR-486通过调控NLRP3/IL-1β信号通路对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心脏巨噬细胞M1/M2表型分化的影响及相关机制.方法 取40只C57BL/6小鼠随机分为2组,对照组常规饲养小鼠,不给予任何特殊处理;AngⅡ组小鼠皮下埋入AngⅡ渗透泵.另取40只皮下埋入AngⅡ渗透泵的小鼠随机分为2组,对照组小鼠尾静脉注射AAV9-Fugw腺相关病毒;过表达miR-486组小鼠尾静脉注射OE-AAV9-miR-486腺相关病毒;同时,取40只C57BL/6小鼠皮下埋入AngⅡ泵并随机分为2组:对照组小鼠心肌层注射DMSO,NLRP3/IL-1β信号通路抑制组小鼠心肌层注射CY-09.荧光定量PCR检测心钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)和脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的表达变化,WGA染色检测心肌细胞大小变化,荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞标志基因iL6和iNOS以及M2型巨噬细胞标志基因Arg1和CD206表达变化.另外,取生长融合至80％的心脏巨噬细胞,并随机分为2组:WT组转染包含野生型NLRP3 3'-UTR的构建物,Mut组转染突变型NLRP3 3'-UTR的构建物.细胞转染48 h后,荧光素酶实验检测miR-486和NLRP3的结合情况.另取生长融合至80％的心脏巨噬细胞,并随机分为3组:对照组常规培养细胞,不给予任何特殊处理;miR-486 mimic组给予50 umol/L的miR-486 mimic药物刺激;miR-486 inhibitor组给予100 μmol/L的miR-486 inhibitor药物刺激,以上细胞处理48 h后进行检测.免疫印迹检测心脏巨噬细胞中NLRP3和IL-1β表达变化.结果 荧光定量PCR实验显示Ang Ⅱ组小鼠心脏组织中病理性肥大相关基因ANP和BNP表达上调,WGA染色实验显示AngⅡ组小鼠心肌细胞明显变大,荧光定量PCR实验显示Ang Ⅱ组小鼠心脏组织中巨噬细胞M1型标志物白细胞介素IL-6和诱导型一氧化氮合酶iNOS表达升高、M2型标志物精氨酸酶Arg-1和白细胞分化抗原CD206表达明显降低.AngⅡ组小鼠尾静脉注射过表达miR-486腺相关病毒或者心肌层注射NLRP3/IL-1β信号通路抑制剂后,荧光定量PCR实验显示小鼠心脏组织中病理性肥大相关基因ANP和BNP表达下调,WGA染色实验显示小鼠心肌细胞明显变小,荧光定量PCR实验显示小鼠心脏组织中巨噬细胞M1型标志物白细胞介素IL-6和诱导型一氧化氮合酶iNOS表达降低、M2型标志物精氨酸酶Arg-1和白细胞分化抗原CD206表达明显升高.荧光素酶检测显示miR-486可以与NLRP3的3'-UTR区域结合,过表达miR-486抑制NLRP3和IL-1β表达,抑制miR-486表达促进NLRP3和IL-1β表达.结论 miR-486通过NLRP3/IL-1β信号通路影响AngⅡ诱导的心脏巨噬细胞M1/M2表型分化,达到抑制病理性肥大的效果.