碱基切除修复基因OGG1对紫外线诱导晶状体上皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨碱基切除修复基因8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)对紫外线(UVB)诱导晶状体上皮细胞损伤(LEC)的保护作用.方法 通过UVB照射人LEC(SRA01/04细胞株)诱导细胞氧化损伤模型,利用siRNA敲降技术针对靶基因OGG1设计3个siRNA(分别为siOGG1#1、siOGG1#2和siOGG1#3).同时,为了验证出敲降效率最高的siOGG1,依据转染情况将细胞分为siOGG1#1组、siOGG1#2组、siOGG1#3组、siNC组和空白对照组(不转染).后续为了验证OGG1的表达下调对氧化损伤环境下细胞的作用,将细胞分为空白对照组、UVB组、UVB+siNC组和UVB+siOGG1#2组,观察各组细胞凋亡相关蛋白的表达变化.采用实时荧光定量-PCR检测各组细胞目的基因mRNA的表达,免疫印迹实验检测各组细胞相关蛋白的表达.免疫荧光法检测UVB+siNC组和UVB+si-OGG1#2组中受损DNA的标记物15A3的荧光强度变化.采用免疫荧光法检测细胞DNA氧化损伤情况,CCK8实验检测细胞活力.结果 实时荧光定量-PCR检测结果显示:UVB照射时间为10 min时,OGG1的相对表达量最高;免疫印迹实验检测结果显示:随着UVB照射时间的延长,细胞内OGG1蛋白相对表达量呈时间依赖性下降.因此,细胞氧化损伤模型采用UVB照射10 min处理细胞.实时荧光定量-PCR检测结果显示:与siNC组相比,靶向设计的转染siOGG1组的三个亚组中细胞OGG1 mRNA相对表达量均显著降低(均为P<0.001),siOGG1#2组降低最为明显.免疫荧光染色结果显示:与UVB+siNC组相比,UVB+siOGG1#2组15A3(染色反应底物是8-oxoG,它是OGG1的修复作用靶点)染色阳性细胞明显增多.CCK8实验结果显示:与UVB+siNC组和空白对照组相比,UVB+si-OGG1#2组细胞活力均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.01).免疫印迹实验检测结果显示:与UVB+siNC组相比,转染后UVB+siOGG1#2组细胞促进凋亡的蛋白BAX表达明显增加,而抑制凋亡的蛋白BCL-2表达则明显下降(均为P<0.001).结论 OGG1基因在UVB诱导的LEC氧化损伤模型中通过BER通路参与受损DNA的修复过程,调控LEC内受损DNA的修复和细胞凋亡过程.