吡格列酮对高糖高脂诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的 探讨吡格列酮对高糖高脂诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 体外培养H9C2心肌细胞,通过CCK-8法进行细胞毒性试验分别确定高糖(HG)和棕榈酸(PA)最佳干预浓度,选取0.1 mmol/L PA和50 mmol/L HG共同培养细胞建立高糖高脂损伤模型,不同浓度吡格列酮(PGZ)干预高糖高脂损伤细胞12、24及48 h后通过CCK-8试验选取有效的干预浓度和干预时间.随后细胞分为:对照组(25 mmol/L葡萄糖)、溶剂组(棕榈酸溶剂+二甲基亚砜)、HGPA组(50 mmol/L葡萄糖+0.1 mmol/L PA)、H-PGZ组(10μmol/L PGZ+HGPA)和L-PGZ组(5μmol/L PGZ+HGPA),采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;DCFH-DA法检测活性氧簇(ROS)水平;微板法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)水平;Western blot法检测蛋白激酶B(T-AKT)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(Caspase3)、剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(C-Caspase3)、B-淋巴细胞瘤基因-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)的蛋白表达.NAC(1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸)+HGPA组和HGPA组干预24 h后检测上述AKT通路及凋亡相关蛋白表达.结果 48 h内0、0.05、0.1、0.2、0.4 mmol/L PA组H9C2细胞活力依次降低;12 h时,与25 mmol/L葡萄糖组比较,50、75以及100 mmol/L葡萄糖组细胞活力增加,24 h、48 h时25、35、50、75、100 mmol/L葡萄糖组细胞活力依次增加;与对照组比较,48 h内HGPA组细胞活力降低(P<0.05);与HGPA组比较,12 h时80μmol/L组细胞活力降低(P<0.05),24 h时10μmol/L PGZ组细胞活力增加,40、80μmol/L PGZ组细胞活力降低(P<0.05),48 h时5、10和20μmol/L PGZ组细胞活力增加,40、80μmol/L PGZ组细胞活力降低(P<0.05);与对照组比较,HGPA组凋亡率、ROS、MDA、C-Caspase3、BAX表达明显升高,SOD、P-AKT、BCL-2表达降低(P<0.05);HGPA组、L-PGZ组、H-PGZ组的凋亡率、ROS、MDA、C-Caspase3、BAX依次降低,SOD、P-AKT、BCL-2表达依次升高(P<0.05).与HGPA组比较,NAC+HGPA组C-Caspase3表达降低,P-AKT、Caspase3表达升高(P<0.05).结论 PGZ对ROS有抑制作用,可以促进AKT通路的活化,减轻高糖棕榈酸诱导的H9C2心肌细胞凋亡.