非洲猪瘟病毒p30蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)快速、高效和高通量的血清学诊断方法,本研究针对ASFVPig/HLJ/2018毒株序列CP204L(p30)基因,构建了重组质粒pET-28a-p30,并通过原核表达系统获得ASFV重组p30蛋白,试验发现重组蛋白主要在包涵体中表达.经Western blot鉴定重组p30蛋白的反应原性良好.通过带有His标签的镍柱进行亲和层析,将纯化后的目的蛋白作为包被抗原,建立了 ASFV抗体间接EL1SA检测方法.此方法引入S/P值进行阴阳性判定,其临界值为0.8.特异性试验表明本方法能够特异性地检测ASFV抗体.本方法批内变异系数在1.10％～6.70％之间,批间变异系数在1.08％～9.55％之间,均小于10％.灵敏性试验表明检测限可以达到1:1 024.将本研究建立的方法和商品化试剂盒进行了符合率的比较,结果显示,阳性符合率为98.91％(91/92),阴性符合率为98.75％(158/160),总体符合率为98.8％(249/252).研究表明,本方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性和符合率,表明其性能良好,具有较强的临床应用价值.