非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立

为建立一种能检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的阻断ELISA方法,本研究以真核表达后纯化的ASFV p30重组蛋白作为包被抗原,以特异性单抗作为阻断抗体,经条件优化、特异性试验和敏感性试验,建立了一种检测血清中ASFV抗体的阻断ELISA方法.结果 显示,纯化后的p30重组蛋白大小约为25 ku,建立的ASFV抗体阻断ELISA检测方法通过方阵试验优化后,最终确定了抗原最佳包被浓度为1 μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶2,最佳封闭液为5％ BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶20000,阴阳性血清临界值为35.11％.本方法与PCV3灭活阳性血清、PRRSV灭活阳性血清、SVA灭活阳性血清、PRV灭活阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性.本方法检测ASFV阳性血清的敏感性可达1∶128.本试验建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,在非洲猪瘟的临床检测中具有广泛的应用价值.