基于布鲁氏菌Dps蛋白间接ELISA检测方法的建立与初步应用

为建立一种布鲁氏菌病早期快速诊断的血清学方法,进一步加强对布鲁氏菌病的防控.对布鲁氏菌Dps蛋白进行生物信息学分析、原核表达,将纯化后的重组蛋白作为包被抗原,建立了布鲁氏菌病血清学间接ELISA检测方法并进行初步应用.结果显示,当重组蛋白Dps包被量为0.25 μg,5％脱脂奶粉溶液封闭1.5 h,用稀释度为1∶1 000的一抗孵育1h,稀释度为1∶5000的二抗孵育0.5h,显色20min时建立的间接ELISA方法条件最优,该方法的临界值D450为0.694,与凝集试验的总符合率达到91.1％(82/90),同时具有较好的特异性和重复性.应用本方法对新疆伊犁地区2个羊场的308份血清进行检测,布鲁氏菌抗体阳性率为2.27％(7/308).结果表明,本研究建立了特异性高、重复性好的血清学间接ELISA检测方法,为布鲁氏菌病的诊断和流行病学调查提供了参考.