农杆菌介导的MsDUF基因转化紫花苜蓿的遗传转化体系建立及优化

为建立适宜MsDUF基因转化紫花苜蓿的遗传转化体系,本试验在已知的紫花苜蓿再生体系的基础上,采用农杆菌介导法,以保定紫花苜蓿(Medicago sativa L.cv.Baoding)下胚轴和子叶为转化受体,将MsDUF基因导入到紫花苜蓿中,通过对愈伤诱导、分化及生根培养阶段抗生素浓度的筛选建立了优化的遗传转化体系,同时对筛选获得的转基因紫花苜蓿进行PCR和RT-PCR检测.结果表明,农杆菌介导的MsDUF基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2 d的紫花苜蓿下胚轴用含pCAMBIA1301-MsDUF质粒的农杆菌菌液(OD600为0.3～0.5)侵染10 min,共培养暗处理2 d后转入含30 mg/L Hyg和500 mg/L Cef的愈伤诱导培养基和分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2～3 cm高时转入含30 mg/L Hyg和300 mg/L Cef的生根培养基上,得到6株经PCR检测为阳性的抗性植株;选取5株进行RT-PCR检测,均检测出大小与目的条带相吻合的清晰条带,证明MsDUF基因已成功转入保定紫花苜蓿中.本试验成功建立了农杆菌介导的高效MsDUF基因转化紫花苜蓿的遗传转化体系,为进一步研究MsDUF基因功能奠定了基础,同时为紫花苜蓿育种和种质创新提供了基础材料.