牦牛NGF基因克隆及其在生殖器官中的表达定位

旨在探究NGF基因的生物学特性及其在母牦牛生殖器官中的表达特性.本研究收集黄体期母牦牛的心、肝、脾、肺、肾以及胎牛期、卵泡期、黄体期、妊娠期母牦牛的卵巢、子宫和输卵管(n=3),利用RT-PCR克隆牦牛NGF基因,并对其序列进行生物信息学分析,利用RT-qPCR技术分析NGF基因的组织表达特性,利用免疫组化技术(IHC)定位NGF蛋白在牦牛生殖器官中的表达分布.结果显示,牦牛NGF基因CDS区全长为726 bp,共编码241个氨基酸,编码的蛋白质属于碱性不稳定亲水蛋白;NGF氨基酸系统进化树结果显示,牦牛首先与黄牛聚为一类,与其他物种的同源性均高于87％,说明该基因在进化过程中表现出高度保守性.RT-qPCR结果显示,牦牛NGF基因在卵巢中的表达量极显著高于心、肝、肾、脾、肺、子宫和输卵管(P＜0.01).黄体期卵巢中NGF的相对表达量最高,极显著高于胎牛期、卵泡期和妊娠期(P＜0.01);妊娠期子宫NGF相对表达量较高,显著高于胎牛期和卵泡期(P＜0.05);各时期输卵管的NGF mRNA表达差异不显著.IHC结果显示,NGF蛋白主要在牦牛卵泡的颗粒细胞和卵巢上皮层细胞中表达,且在颗粒层细胞表达最高;在子宫内膜和输卵管的黏膜上皮细胞也有表达.综上,牦牛NGF基因序列在进化过程中较为保守,在卵巢中表达量较高,可能在维持母牦牛卵巢机能和妊娠以及促进黄体功能方面发挥重要的调控作用.